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凱氏定氮儀是根據蛋白質(zhì)中氮的含量恒定的原理,通過(guò)測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質(zhì)含量的儀器。因其蛋白質(zhì)含量測量計算的方法叫做凱氏定氮法,故被稱(chēng)為凱氏定氮儀,又名定氮儀、蛋白質(zhì)測定儀、粗蛋白測定儀。凱氏定氮儀儀器用凱氏方法檢測谷物、食品、飼料、水、土壤、淤泥、沉淀物和化學(xué)品中的氨、蛋白質(zhì)氮含量、酚、揮發(fā)性脂肪酸、二氧化硫、乙醇等含量。具有相當好的性?xún)r(jià)比,僅僅滴定過(guò)程需要人工操作一下,非常適合實(shí)驗室及檢驗機構常規檢測。廣泛用于食品、農作物、種子、土壤、肥料等樣品的含氮量或蛋白質(zhì)含量分析。
凱氏定氮儀原理:
將有機化合物與硫酸共熱使其中的氮轉化為硫酸銨。在這一步中,經(jīng)常會(huì )向混合物中加入硫酸鉀來(lái)提高中間產(chǎn)物的沸點(diǎn)。樣本的分析過(guò)程的終點(diǎn)很好判斷,因為這時(shí)混合物會(huì )變得無(wú)色且透明(開(kāi)始時(shí)很暗)
在得到的溶液中加入少量氫氧化鈉,然后蒸餾。這一步會(huì )將銨鹽轉化成氨。而總氨量(由樣本的含氮量直接決定)會(huì )由反滴定法確定:冷凝管的末端會(huì )浸在硼酸溶液中。氨會(huì )和酸反應,而過(guò)量的酸則會(huì )在甲基橙的指示下用碳酸鈉滴定。滴定所得的結果乘以特定的轉換因子就可以得到結果。
凱氏定氮儀優(yōu)點(diǎn)
對于所有樣品的測定都適用是凱氏定氮法的優(yōu)點(diǎn)。能夠在測定動(dòng)、植物的各種組織、器官以及食品、土壤等成分復雜的蛋白質(zhì)的含量時(shí)被使用。特別是樣品溶液渾濁,用其他方法不能測定,可靠的結果能夠通過(guò)采用凱氏法獲得。
凱氏定氮儀缺點(diǎn)
1、和理論含氮量相比,含堿性氨基酸、酰胺和小分子量氨基酸(甘氨酸、丙氨酸等)偏多的蛋白質(zhì)含氮量明顯非常高,導致測定結果偏高。
2、有著(zhù)相當繁瑣的操作過(guò)程,要求操作者具有很高的技術(shù)熟練度,實(shí)驗室空氣中氨含量會(huì )對其產(chǎn)生影響。
3、測定值會(huì )由于樣品中的非蛋白氮而偏高,所以,在測定前需要先將與樣品共存的非蛋白氮去除。